細(xì)胞轉(zhuǎn)染指的是將外源分子如DNA、RNA等導(dǎo)入到真核細(xì)胞內(nèi)部的技術(shù)。隨著基因和蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為科研實(shí)驗(yàn)中常用的技術(shù)手段之一。對于細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)染試劑、轉(zhuǎn)染方法、細(xì)胞狀態(tài)等都會影響到細(xì)胞轉(zhuǎn)染的效率，本文主要對影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的8個(gè)因素做一介紹。

　　1.轉(zhuǎn)染試劑

　　瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可以選擇不同的轉(zhuǎn)染試劑，轉(zhuǎn)染試劑的選擇又可以根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的文獻(xiàn)，已經(jīng)有很多細(xì)胞株被成功轉(zhuǎn)染，通過文獻(xiàn)資料可以參考最適的轉(zhuǎn)染試劑，當(dāng)然也要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需求選擇。一般來說轉(zhuǎn)染試劑的要求是低毒，高效，廉價(jià)易得。

　　2.轉(zhuǎn)染方法

　　現(xiàn)在有多種方式能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染，如磷酸鈣法，電穿孔法，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、逆轉(zhuǎn)錄病毒法等等（更多細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法）。不同的轉(zhuǎn)染方式其轉(zhuǎn)染效率也不盡相同需要根據(jù)細(xì)胞的性質(zhì)及不同的操作手法，摸索最佳的轉(zhuǎn)染條件。

　　3.細(xì)胞狀態(tài)

　　一般傳代數(shù)小于50代以下的細(xì)胞即能保證基因型不變。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染最合適的細(xì)胞是達(dá)到對數(shù)生長期的細(xì)胞，此時(shí)細(xì)胞生長旺盛，最容易被轉(zhuǎn)染。同一種系的細(xì)胞株，在不同實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)條件下，其生物學(xué)性狀都會產(chǎn)生不同改變，從而導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化。因此，針對這種轉(zhuǎn)染效率降低的情況，應(yīng)轉(zhuǎn)用新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染達(dá)到好的結(jié)果。

　　4.載體構(gòu)建

　　基因產(chǎn)物對細(xì)胞不能有毒害作用，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染難以進(jìn)行。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建選擇可調(diào)控，強(qiáng)度合適的啟動子很重要，可以做空載體或相同載體的其他基因?yàn)閷φ张懦拘詫?xì)胞的影響。病毒載體對特定宿主細(xì)胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細(xì)胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄病毒需侵染分裂期的宿主細(xì)胞。

　　5.細(xì)胞培養(yǎng)基

　　培養(yǎng)基是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的最基本要素。不同細(xì)胞選擇不同的培養(yǎng)基，血清和其他添加物。使用的轉(zhuǎn)染試劑要參考其說明書。培養(yǎng)物一定要避免細(xì)菌，支原體真菌的污染。

　　6.血清

　　血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的成分不明確添加物，對不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細(xì)胞生長，因此也會影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，不同批次購買的血清質(zhì)量也會存在差別。對于傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法要求在無血清培養(yǎng)基條件下轉(zhuǎn)染，血清被認(rèn)為會降低瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的效率。針對現(xiàn)有人們常用的的轉(zhuǎn)染試劑來說，血清的存在已不會影響轉(zhuǎn)染效率，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率。在轉(zhuǎn)染過程中*可以使用血清，針對RNA轉(zhuǎn)染，消除血清中潛在的核糖核酸酶污染要格外關(guān)注。且血清比較珍貴，胎牛血清，馬或牛血清都常被用到，價(jià)格也不盡相同，根據(jù)自身選擇。

　　7.細(xì)胞密度

　　細(xì)胞密度對轉(zhuǎn)染效率也有一定影響，一般轉(zhuǎn)染時(shí)貼壁細(xì)胞密度為50-90%，具體要根據(jù)選用的轉(zhuǎn)染試劑的說明書。不同的轉(zhuǎn)染試劑最適的細(xì)胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會因不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。

　　例如陽離子脂質(zhì)體具有微量的細(xì)胞毒性而要更高的細(xì)胞鋪板密度或更多的懸浮細(xì)胞數(shù)，盡量在細(xì)胞最適的生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)染，以求最佳的轉(zhuǎn)染效果。

　　8.DNA質(zhì)量

　　針對一般常用的轉(zhuǎn)染技術(shù)都是基于電荷吸引的原理轉(zhuǎn)染的，如果DNA的純度不高，存在其他雜質(zhì)，如鹽離子等都會影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成。針對市面上現(xiàn)有的超純質(zhì)粒抽提的試劑盒，能達(dá)到非常高的純度效果，從而可以避免DNA純度的影響。