裸体按摩xxxxx高清,野花香高清视频在线观看免费 ,国产成人精品亚洲777人妖,久久精品国产亚洲av大全

您好!歡迎訪問和元李記(上海)生物技術有限公司網站!
咨詢熱線

18616108315

當前位置:首頁 > 技術文章 > 實驗干貨|蛋白質濃度測定之BCA法的技巧

實驗干貨|蛋白質濃度測定之BCA法的技巧

更新時間:2024-12-20      點擊次數:42

BCA法是Lowry法的一種改進方法。與Lowery法相比,BCA法操作起來更加簡單方便,其試劑及其形成的顏色絡合物穩(wěn)定性更好,幾乎不受其他干擾物的影響,并且靈敏度高(微量檢測可達到0.5ug/ml),應用起來更加靈活。BCA法與Bradford法相比,BCA法的顯著優(yōu)點是不受去垢劑(SDS,Triton X-100,Tween-20等)的影響。

BCA法實驗的原理

BCA是一種穩(wěn)定的堿性水溶性復合物。在堿性條件下,蛋白質將Cu2+還原為Cu+,Cu+與BCA Reagent A(含有BCA)相互作用產生敏感的顏色反應,形成紫色的絡合物。該水溶性的復合物在A562 nm處顯示強烈的吸光性,吸光度和蛋白質濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系,根據吸光值可以推算出蛋白濃度。

1734663671211.jpg

BCA實驗物資與設備

? 物資清單

1. BCA試劑盒:通常包含BCA溶液A與B,使用前需按比例混合均勻。

2. 蛋白質標準品:一般采用牛血清白蛋白(BSA)作為標準蛋白,用于繪制標準曲線。

3. 比色皿:可選用96孔板或其他規(guī)格,用于盛放樣品并進行光度測量。

4. 離心管:用于樣品的制備與儲存。

5. 移液器及配套吸頭:用于精確量取與添加不同體積的液體。

6. 去離子水:用于配制溶液與稀釋樣品

? 設備介紹

光譜光度計:在BCA法測定蛋白質濃度的過程中,光譜光度計是需要的儀器,它用于測量樣品在特定波長(562納米)下的吸光度。在選擇光譜光度計時,應關注以下幾點:

 • 精確度:儀器必須能夠精確讀取至0.001吸光單位的變化。

 • 波長范圍:確保設備能夠覆蓋所需的測試波長,特別是BCA法所需的562納米。

 • 處理能力:根據實驗規(guī)模,選擇具有合適讀取速度與樣品處理能力的光度計,如單孔至多孔板光度計。

BCA實驗操作步驟

一、微孔板檢測

① BCA工作液配制。根據標準品和樣品數量,按50體積BCA 試劑A加1體積BCA 試劑 B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。

② 標準曲線繪制。取一塊酶標板(酶標板的板底是不能用手去觸碰的,一般拿的是側壁),按下表數據加入試劑:

③ 樣品準備:將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當濃度,取20 ul樣品,加入200 ul BCA工作液(蛋白液:工作液=1:20)。加樣時槍要輕柔吹打,將其中液體混勻。

④ 振蕩混勻后,37℃放置20 ~ 30 min。冷卻至室溫。顏色變化如下圖:

⑤ 用酶標儀測定A562 nm處的吸光值,以不含BSA的吸光值為空白對照。

⑥ 以蛋白含量(ug)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪出標準曲線。

⑦ 根據測得的吸光值,在標準曲線上即可計算出樣品的蛋白含量。

⑧ 計算蛋白濃度:以查得的蛋白含量除以樣品體積20 ul,再乘以相應的稀釋倍數即可得到待測樣品的實際濃度。

二、微孔板檢測

① BCA工作液配制。根據標準品和樣品數量,按 50 體積BCA Reagent A加1體積BCA Reagent B(50:1)配制適量BCA工作液,充分混勻。

② 選取7支潔凈試管,其中6支標號1~6號管(包含第1支空白管),另外1支標記待測管。按照下表用移液器準確移取相應的標準蛋白溶液或待測樣品、蒸餾水和BCA工作液于試管中。

③ 取適量體積的標準蛋白(根據情況用去離子水適度稀釋),以蛋白液:工作液=1:20 的比例混勻。37 ℃ 溫浴 30 min。冷卻至室溫。

④ 然后吸取各試管中的溶液于比色皿中并用分光光度計的562nm波長比色測定吸光度值。

BCA實驗注意事項

 • 為保證蛋白濃度測量的準確性,最好做3個復孔,必要時剔除離群值。

 •  BCA法測蛋白濃度易受時間及溫度的影響,所以最好每次測定都做標準曲線。

 • 加樣時一定要準確加樣且盡可能避免氣泡產生,以免影響測量(加樣結束可以用注射器戳破氣泡,并將96孔板放在搖床上混勻片刻,以使樣品與工作液充分接觸)。

 • 孵育結束應盡快檢測吸光度,并盡可能加快檢測速度,以免帶來誤差。


微信咨詢
地址:上海市浦東新區(qū)紫萍路908弄 傳真:021-50724961
©2024 和元李記(上海)生物技術有限公司 版權所有 All Rights Reserved.  備案號:滬ICP備2023007219號-1
高潮久久久久久久久不卡| 精品无码久久久久久国产| 小妖精腰细奶大H侍卫| 大肉蒂被嘬的好爽h公主| 99久久人妻无码精品系列蜜桃| 高辣慎入hh出轨| 国产成人精品一区二三区| 亚洲A∨无码一区二区三区| 我和美艳的巨ru麻麻| zoom与牛性胶zoom| 国产精品久久久久精品三级卜| 丁香色婷婷国产精品视频| 天天躁日日躁狠狠躁欧美老妇小说| 玖玖热麻豆国产精品视频| А√天堂中文在线官网| 欧美日韩国产在线人成| 一女多夫好涨四根高h| 成熟女人特级毛片WWW免费| 全肉变态重口调教高辣小说| 色情久久久av熟女人妻网站| 国务院发展研究中心主任| 亚洲精品无码一区二区三区网雨| 成人亚洲a片v一区二区三区蜜月| 日本三级片电影| 成人国产片女人爽到高潮网站| 亚洲色精品三区二区一区| 男人用嘴添女人下身免费视频| 又圆又大的奶越摸越大| 一本久久精品一区二区| 无码gogo大胆啪啪艺术| 久久久久久久99精品免费观看| 免费网站看v片在线18禁无码| 欧美成人精品第一区二区三区| 他揉捏她两乳不停呻吟人妻| 异地男朋友回来都跟饿狼似的| 国产日产久久高清欧美一区| 婷婷精品国产亚洲AV麻豆不片| 金铁霖简历及个人资料| 4P调教三根一起男男| 亚洲欧美强伦一区二区| 久久久久久久亚洲av无码|