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ecL化學(xué)發(fā)光液的操作注意事項(xiàng)是什么

更新時(shí)間:2018-09-10      點(diǎn)擊次數(shù):2991
    ecL化學(xué)發(fā)光液注意事項(xiàng),由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同,以及抗體的保存條件和保存時(shí)間的不同,初次使用時(shí)建議對(duì)抗體用量進(jìn)行優(yōu)化,以取得更優(yōu)效果。勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強(qiáng)光下,否則會(huì)導(dǎo)致其失活;建議保存在棕色瓶中,并避免長時(shí)間暴露在陽光下,實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)試劑盒影響不大;除了X光膠片曝光和洗片處理外,所有步驟均不必在暗室中操作。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜,以確保印跡膜處于濕潤狀態(tài);使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號(hào)的產(chǎn)生。使用前配制ECL工作液,體積足夠覆蓋膜片即可;取A液和B液時(shí)一定要用不同的槍頭,互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活;配制完畢建議立即使用工作液,室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低;棄去使用過的混合試劑。印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時(shí)發(fā)出的光,然后隨著時(shí)間的延長而緩慢減弱,至30 min仍可保持90%的光信號(hào),至24小時(shí)仍可保持約60%的光信號(hào);蛋白點(diǎn)熒光較弱時(shí)可以適當(dāng)延長曝光時(shí)間;使用過少的ECL工作液不利反應(yīng)進(jìn)行,為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小,但勿降低ECL工作液使用比例。使用生物素/親和素體系時(shí),避免使用脫脂奶粉作為封閉液,因?yàn)槊撝谭壑泻卸喾N內(nèi)源性生物素,容易產(chǎn)生非特異性信號(hào)。避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜,相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
    ecL化學(xué)發(fā)光液使用方法,印跡膜制備:執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記的抗體或者HRP標(biāo)記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物,檢測系統(tǒng)必須基于HRP酶標(biāo)記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對(duì)于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,混合均勻并盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約1分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2 ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。蛋白或核酸信號(hào)顯現(xiàn),用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜*干燥。將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡。用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光,根據(jù)信號(hào)強(qiáng)弱適當(dāng)調(diào)整曝光時(shí)間,也可選擇不同時(shí)間多次曝光,以取得更佳效果。
    ecL化學(xué)發(fā)光液 高靈敏性,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,可檢測低達(dá)約300飛克的蛋白量。信號(hào)穩(wěn)定,發(fā)光時(shí)間長,能進(jìn)行多次曝光,30min后仍可維持約90%的發(fā)光強(qiáng)度,6小時(shí)后仍能維持60%以上的發(fā)光強(qiáng)度。信號(hào)強(qiáng),發(fā)光信號(hào)比對(duì)碘苯酚增強(qiáng)的HRP-魯米諾檢測體系更強(qiáng)。穩(wěn)定性高,試劑盒可在室溫長期穩(wěn)定存放。
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