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異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)是β–半乳糖苷酶的活性誘導(dǎo)物質(zhì),常用于藍(lán)白斑篩選及誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。當(dāng)pUC系列的載體DNA(或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細(xì)胞為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)、或用M13噬菌體的載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),如果在平板培養(yǎng)基中加入X–Gal和本產(chǎn)品,由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性,可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體
X-gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下會產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物?;谶@個(gè)特點(diǎn),當(dāng)pUC系列載體DNA以lacZ 缺欠細(xì)胞作為宿主進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí),或M13噬菌體載體DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)染時(shí),如果在培養(yǎng)基中加入本產(chǎn)品和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互補(bǔ)性,可以根據(jù)是否呈現(xiàn)白色而方便地挑選擇出基因重組體。
氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素,通過與50S核糖體亞基結(jié)合,抑制氨酰-tRNA連接到核糖體,阻斷肽酰轉(zhuǎn)移酶步驟,從而抑制蛋白質(zhì)合成,還能抑制葉綠體和線粒體蛋白質(zhì)合成,和核糖體產(chǎn)生(p)ppGpp,抑制RNA轉(zhuǎn)錄,通常用作一種抑菌劑。有效作用于各種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,特別是引起腦膜炎的細(xì)菌,常用來研究蛋白質(zhì)合成和篩選氯霉素抗性基因的轉(zhuǎn)化。
鏈霉素(Streptomycin)是一種氨基糖苷類抗生素,通過與30S核糖體結(jié)合致使mRNA誤讀,從而抑制蛋白質(zhì)的合成。對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有效。鏈霉素可在細(xì)胞培養(yǎng)中抑制細(xì)菌污染;分子生物學(xué)中,常用來篩選成功轉(zhuǎn)化鏈霉素基因的細(xì)菌克隆。
羧芐青霉素(Carbenicillin)是一種結(jié)構(gòu)類似青霉素的β-內(nèi)酰胺類抗生素。不同于大多數(shù)β-內(nèi)酰胺,此抗生素主要作用于包括銅綠假單胞菌和常見腸道菌在內(nèi)的革蘭氏陰性菌。其作用機(jī)制在于失活細(xì)菌細(xì)胞膜內(nèi)部的轉(zhuǎn)肽酶,進(jìn)而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,終導(dǎo)致細(xì)菌死亡。因其穩(wěn)定性提高,常替代青霉素用于篩選步驟,能有效減少衛(wèi)星菌落生成。另外,常用在植物培養(yǎng)中,以調(diào)解細(xì)菌生長,使其再生頻率顯
四環(huán)素(Tetracycline)是一種光譜型抗生素,靶向抑制各種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,以及某些真核細(xì)胞的生長。其作用機(jī)制在于:主動擴(kuò)散穿透細(xì)胞膜上的質(zhì)子通道,進(jìn)入細(xì)胞后與30S核糖體結(jié)合,通過阻止氨基酰-tRNA轉(zhuǎn)移到mRNA-核糖體復(fù)合物上的受體部位(A部位),從而抑制蛋白質(zhì)合成。四環(huán)素還能與細(xì)菌50S核糖體亞基結(jié)合,改變細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)含物流出。這些抑制效應(yīng)通過清洗步驟即可逆轉(zhuǎn),
卡那霉素(Kanamycin)是一種氨基糖苷類抗生素,通過與30S核糖體結(jié)合致使mRNA誤讀,從而抑制蛋白質(zhì)的合成。對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有效。卡那霉素可在細(xì)胞培養(yǎng)中抑制細(xì)菌污染;分子生物學(xué)中,常用來篩選成功轉(zhuǎn)化卡那霉素基因的細(xì)菌克?。灰渤S糜谵r(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),選擇性篩選攜帶npt Ⅱ(APH3)基因的植物組織。
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