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為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。我們提倡新鮮樣品應(yīng)盡早檢測(cè)，對(duì)收集后一周內(nèi)檢測(cè)的樣本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?。如有特殊原因需要周期性收集樣本，在取材后講標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差，蛋白容易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，故應(yīng)避免反復(fù)凍融。不同的樣本請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況處理。樣品制備方法1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再...

細(xì)胞生長(zhǎng)，我們的試驗(yàn)以及經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)，我們的客戶以及其它血清生產(chǎn)商也證明了這一點(diǎn)。過(guò)濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過(guò)濾。一般說(shuō)來(lái)，因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時(shí)后已經(jīng)經(jīng)過(guò)100nm或者40nm的過(guò)濾處理，并且經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的無(wú)菌檢測(cè)，因此不推薦再過(guò)濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒(méi)有必要再過(guò)濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭(zhēng)端。研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會(huì)比較警覺(jué)的去...

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體*于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)...

牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中，因?yàn)橛行┟冈诘蜐舛认虏环€(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護(hù)或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對(duì)多數(shù)底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實(shí)現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃，酶切反應(yīng)超過(guò)1h時(shí)，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因?yàn)樵诓缓Ｑ灏椎鞍椎姆磻?yīng)緩沖液中，許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時(shí)間。而B(niǎo)SA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限...

蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質(zhì)。蛋白酶K分離自一種可在角質(zhì)上生長(zhǎng)的真菌白色側(cè)齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質(zhì)（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點(diǎn)為帶有封閉氨基基團(tuán)、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對(duì)分子量約為29.3kDa,是一種切割...

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載...